腦立體定位儀經(jīng)過搬動(dòng)或長期不用后，使用前需先加以校驗(yàn)。重點(diǎn)是檢驗(yàn)電極移動(dòng)架各滑尺是否保持直角，可用三角板測定各滑尺所成的角度是否是直角;各銜接部與螺絲有沒有松動(dòng);滑尺是否太松;檢查主框兩臂的平行情況;觀察固定頭的裝置兩側(cè)對稱程度，小框是否與主框平行。

　　檢查腦立體定位儀*后，可進(jìn)行下列校驗(yàn)性操作：

　　1、將兩側(cè)耳桿柱旋松，在主框上前后滑動(dòng)，然后再按照原規(guī)定刻度裝好，看兩側(cè)耳桿尖是否*對正。

　　2、取下一側(cè)耳桿，將一側(cè)電極移動(dòng)架裝好，前后左右上下移動(dòng)各滑尺，使裝在電極夾上的金屬定位針尖正對耳桿尖的中心，記下各滑尺的刻度讀數(shù)，再卸下移動(dòng)架再裝上，并按上法測定耳桿尖的部位，記下三個(gè)滑尺的讀數(shù)，反復(fù)操作取平均數(shù)首先將放置水平的腦立體定位儀上的兩個(gè)滑道，按實(shí)驗(yàn)的要求調(diào)節(jié)好合適的高度后。

　　3、然后再用水平尺調(diào)正好兩個(gè)滑道的前后、左右水平。這時(shí)再把安置在滑道上的手動(dòng)微推進(jìn)器按上面的刻度調(diào)節(jié)垂直。

　　確定腦立體定位零點(diǎn)，小鼠腦定位的系統(tǒng)大致分兩種：

　　1、用耳間線中心定位，首先將兩個(gè)耳棒在腦立體定位儀滑道中間部位彼此相接觸(兩個(gè)耳棒讀數(shù)相同)，旋緊鏍絲。

　　2、取下一側(cè)耳棒，另一耳棒不動(dòng)。調(diào)節(jié)移動(dòng)推進(jìn)器，使校驗(yàn)電極與耳棒的中心點(diǎn)相觸，即為A點(diǎn)(即耳間線中心點(diǎn))，并記下刻度值。

　　3、將推進(jìn)器水平移動(dòng)到門齒鉤的上方，將門齒鉤平面與校驗(yàn)電極相觸。這時(shí)就定出外耳道中心點(diǎn)與門齒牙板上面上沿之間的水平切面0點(diǎn)，記為H0。這時(shí)，動(dòng)物的前囟和后囟基本處在一個(gè)水平面上，相差0-0.1mm。另外，規(guī)定耳間線中心點(diǎn)以上為+，向下為-;向嘴側(cè)為+，向尾側(cè)為-。

　　4、用顱骨標(biāo)志定位(常用前囟)，即以前囟為嘴尾側(cè)0點(diǎn)，由前囟向嘴側(cè)為+，向尾側(cè)為-，其它與上面定位方法相同。